La conta diretta può sfruttare anche coloranti fluorescenti che consentono di suddividere le cellule vitali da quelle morte superando uno dei limiti della conta su vetrini speciali.

Il metodo più moderno è la tecnica FISH (Fluorescent In-Situ Hybridization). Si usano sonde oligonucleotidiche marcate con coloranti fluorescenti che permettono di distinguere popolazioni batteriche diverse nella stessa soluzione.

Conta indiretta

1. Conta in piastra per inclusione o spandimento
2. Conta in substrato liquido attraverso la torbidità o il viraggio di indicatori

La conta indiretta in piastra sfrutta la proprietà che solo le cellule vitali hanno di formare colonie. Anche questo metodo presenta dei punti deboli e quindi si preferisce dare come risultato non il numero dei batteri ma le unità formanti colonie (UFC) che si possono contare con appositi apparecchi o agevolando il conteggio attraverso l'uso di membrane filtranti come in foto. Ovviamente, visto che in genere i campioni vengono diluiti prima della semina, bisogna poi tenere conto del fattore di diluizione per avere la definitiva conta vitale.

La conta in substrato liquido sfrutta per lo più la torbidità che acquisisce il mezzo colturale con l'aumento del numero dei batteri. Sono ormai sistemi automatizzati.

La valutazione della biomassa

In questa pagina viene solo accennata perché nell'introduzione è stato specificato che l'obiettivo era solo quello di esporre l'aumento numerico della popolazione batterica. I metodi sono essenzialmente tre.

• Il metodo gravimetrico, diretto, che consiste nel separare la massa batterica dal mezzo colturale, lavarla per evitare che rimangano residui del terreno di coltura, farla seccare e pesarla
• Il metodo indiretto che usa lo spettrofotometro per cui si misura la luce assorbita o dispersa dalla massa batterica
• Il metodo chimico indiretto che misura una delle seguenti biomolecole, proteine o acidi nucleici

Tutti i metodi fin qui descritti sono utilizzabili anche sulla maggior parte degli altri microrganismi dotati di cellula.

E l'ambiente?

In parte lo abbiamo già visto esponendo la curva diauxica. La presenza dei nutrienti è un aspetto essenziale. Ma l'elenco non si ferma certo qui. I fattori riportati si riferiscono solo all'attività in laboratorio altrimenti andrebbero citati anche pressione e radiazioni.

• Temperatura. I batteri si dividono principalmente in tre categorie a seconda del range in cui "preferiscono vivere". Sono gli psicrofili, i mesofili e i termofili. I primi crescono anche negli ambienti refrigerati; i secondi preferiscono il corpo umano e i terzi sopportano bene i 70°C e quindi li troviamo anche nelle sorgenti termali. Nei laboratori vengono studiati tutte queste categorie per esigenze diverse.
• pH. Un altro importante fattore che ci fa suddividere i batteri in tre grossi gruppi: i neutrofili, gli acidofili e gli alcalinofili.
• Presenza di ossigeno. Uno dei primi argomenti che si studia sui batteri è la classificazione rispetto al comportamento con l'ossigeno atmosferico. Ci sono gli aerobi obbligati che necessitano di O2 e gli anaerobi obbligati per cui è determinante la situazione opposta. In mezzo una serie di sfumature che fanno parlare di anaerobi facoltativi (adottano indifferentemente la via della respirazione cellulare o della fermentazione), di microaerofili (la crescita avviene solo se l'ossigeno è presente al 2%) e di anaerobi tolleranti (il metabolismo tipico è in assenza di ossigeno ma lo tollerano anche se non lo utilizzano).
• Acqua. L'acqua è fondamentale per tutti gli esseri viventi e ovviamente ne sono sensibili anche i batteri. E anche i batteri devono misurarsi con le condizioni di ipertonicità e ipotonicità dell'ambiente esterno.

Abbiamo aperto con un video e chiudiamo con un video

Lo sapete che con poco si possono far crescere anche a casa sulle piastre Petri?